Características de replicación y supervivencia del virus de viremia primaveral de la carpa (SVCV) aislado en México / Replication and survival traits of spring viremia of carp virus (SVCV) isolated in Mexico

RESUMEN Objetivo. Realizar el aislamiento del virus de la viremia primaveral de la carpa (SVCV) en ejemplares de carpa común (Cyprinus carpió), evaluar su crecimiento en diferentes tipos de células, así como la supervivencia viral a diferentes temperaturas. Materiales y métodos. Diez carpas de entre 400 500 gramos de una laguna del centro de México fueron procesadas para el diagnóstico de SVCV mediante aislamiento en cultivo de células y RT-PCR semianidado. El virus obtenido se inoculó en células EPC, BF-2, CHSE-214 y RTG-2 para determinar diferencias de crecimiento de SVCV. Además, se evaluó la supervivencia del virus conservado a temperatura ambiente (TA 20-25°C), refrigeración (REF 4°C) y congelación (CONG -80°C) hasta once meses. Los órganos internos se procesaron para análisis histológico. Resultados. Los peces analizados no presentaron signos externos sugestivos de enfermedad, pero interna e histopatológicamente se observaron lesiones sugestivas de infección sistémica. SVCV fue aislado en células EPC y BF-2 y confirmado por RT-PCR semianidado. SVCV únicamente indujo CPE en células EPC y BF-2 y fue negativo en RTG-2 y CHSE-214. El virus conservado a TA perdió viabilidad después de cuatro meses post infección (mpi), siendo total a seis mpi; mientras REF y CONG fueron estables durante los once meses de estudio. Conclusiones. La infección subclínica por SVCV fue confirmada en carpas que presentaron lesiones histológicas asociadas a esta infección. SVCV únicamente causó CPE en células EPC y BF-2 y el virus conservó su viabilidad a 4°C y -80°C hasta once meses; mientras que a TA se perdió en seis meses.

ABSTRACT Objective. To perform the isolation of spring viremia of carp virus (SVCV) in common carp (Cyprinus carpió) and evaluate its growth in different cell types and viral survival at different temperatures. Materials and methods. Ten carps of between 400-500 grams of a lagoon in central Mexico were processed for diagnosis of SVCV by isolation in cell culture and by RT-PCR. The virus obtained was inoculated into EPC, BF-2, CHSE-214 and RTG-2 cells to determine differences in virus growth; the survival of virus stored at room temperature (TA 20-25°C), refrigeration (REF 4°C) and freezing (CONG -80°C) up to eleven months was also evaluated. Internal organ samples were processed for histological analysis. Results. The fish analyzed did not show external signs suggestive of disease but internally and histopathologically lesions suggestive of systemic infection were observed. SVCV was isolated in EPC and BF-2 cells and confirmed by semi-nested RT-PCR. SVCV only induced CPE in EPC and BF-2 cells and was negative in RTG-2 and CHSE-214. The virus conserved at TA lost viability after four months post-infection (mpi), being total at six mpi; while REF and CONG were stable during the eleven months. Conclusions. Subclinical SVCV infection was confirmed in carp that presented histological lesions associated with this infection; SVCV only caused CPE in EPC and BF-2 cells; and the virus kept in refrigeration and at -80°C retained its viability up to eleven months; while TA was lost in six months.

Relationship between apoptosis and the BH2 domain sequence of the VP5 peptide of infectious pancreatic necrosis virus / Relación entre apoptosis y secuencia del dominio BH2 del peptido VP5 del virus de la necrosis pancreatica infecciosa

Objective. To determine whether the level of apoptosis induced by infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) is related to the amino acid sequence of the BH2 domain of the VP5 protein and the level of infectivity. Materials and methods. Three IPNV strains were used, the VP2 protein gene was amplified for genotyping and the VP5 sequence was also obtained. The infectivity of the strains was calculated using the viral titer obtained at 12, 24, 36 and 45 hpi in CHSE-214 cells. The percentage of apoptosis in infected cells was visualized by TUNEL assay and immunohistochemistry (caspase 3 detection). Results. The V70/06 and V33/98 strains corresponded to genotype Sp, while V112/06 to VR-299; the amino acid analysis of the V70/06 strain allows its classification as middle virulent strain and V33/98 and V112/06 strains as low virulent ones; infection with the V112/06 strain produced a lower viral titer (p<0.05). The VP5 gene of the 3 strains showed four homologous domains to Bcl-2, however, the BH2 domain was truncated in V70/06 and V33/98 (12 kDa), being complete (15kDa) in V112/06, which also showed the Trp155 residue, equivalent to Trp188 considered as a critical factor for the function of Bcl-2. The average apoptosis was below 12%, showing no differences between strains (p>0.05). Conclusions. The results showed that the differences in the BH2 sequence of the VP5 protein, infectivity and the VP2 sequence are not associated with the modulation of apoptosis.

Objetivo. Determinar si el nivel de apoptosis inducido por cepas del virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV) tiene relación con la secuencia aminoacídica del dominio BH2 de la proteína VP5 y el nivel de infectividad. Materiales y métodos. Se utilizaron tres cepas de IPNV; el gen de la proteína VP2 fue amplificado para genotipificación y se obtuvo la secuencia de VP5. La infectividad de las cepas se calculó mediante el título viral obtenido a 12, 24, 36 y 45 hpi en células CHSE-214. Los porcentajes de apoptosis en células infectadas se visualizaron mediante ensayo TUNEL e inmuno-histoquímica (detección de caspasa 3). Resultados. Las cepas V70/06 y V33/98 correspondieron a genotipo Sp, mientras que V112/06 a VR-299; el análisis aminoacídico relacionó a V70/06 como cepa de mediana virulencia y a V33/98 y V112/06 de baja virulencia; la infección con V112/06 produjo menor título viral (p<0.05). El gen VP5 de las 3 cepas presentó los cuatro dominios homólogos a Bcl-2; sin embargo, el dominio BH2 fue truncado en V70/06 y V33/98 (12 kDa); siendo completo (15kDa) en V112/06, que además, presentó el residuo Trp155, equivalente a Trp188 considerado factor crítico para la función de Bcl-2. El promedio de apoptosis fue inferior a 12%, no se observaron diferencias entre cepas (p>0.05). Conclusiones. Los resultados mostraron que las diferencias en la secuencia de BH2 de la proteína VP5, la infectividad y en la secuencia de la proteína VP2 no están asociadas con la modulación de apoptosis.